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[发明专利]含锰离子重组蛋白的大肠杆菌表达系统及其应用方法-CN201810863252.5有效
发明人：汪小锋;吴玉峰;汪卫;刘艳红;陈火晴 -专利权人：武汉康复得生物科技股份有限公司
申请日： 2018-08-01 - 公布日： 2021-06-18 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了含锰离子重组蛋白的大肠杆菌表达系统及其应用方法。所述大肠杆菌表达系统中的重组表达质粒为以下几种情形之一或其组合：(1)至少包含大肠杆菌分子伴侣基因和含锰离子的酶蛋白基因；(2)包含大肠杆菌分子伴侣基因、含锰离子的酶蛋白基因，以及过表达或抑制锰离子通道相关蛋白基因；(3)包含大肠杆菌分子伴侣基因、含锰离子的酶蛋白基因，以及影响胞内的锰离子浓度相关蛋白基因。通过所述大肠杆菌表达系统的构建及优化，可实现含锰离子酶蛋白的高效可溶且有活性的表达，相比传统方法效率高、纯化工艺简单、成本低，有利于含锰离子酶的工业化生产和应用。
离子重组蛋白大肠杆菌表达系统及其应用方法

[发明专利]一种基于双阻遏策略增强大肠杆菌T7表达系统稳定性的方法-CN201310505664.9有效
发明人：聂尧;徐岩 -专利权人：江南大学
申请日： 2013-10-24 - 公布日： 2014-02-05 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：一种基于双阻遏策略增强大肠杆菌T7表达系统稳定性的方法，属于大肠杆菌表达调控领域。本发明利用基因工程技术，以细菌来源的普鲁兰酶为表达蛋白，构建了表达普鲁兰酶的重组大肠杆菌。通过使用含有lac操纵子和阻遏物基因lacI的pET表达载体pET-22b(+)和pET-28a(+)，构建了重组菌E.coliBL21/pET-22b(+)-pul和E.coliBL21/pET-28a(+)-PelB-pul，利用lac操纵子严谨的双阻遏调控策略，基本消除了毒性外源蛋白的本底表达，提高了冷冻甘油菌种的表达稳定性和乳糖自诱导后的目标蛋白表达量，增强了大肠杆菌表达系统稳定性。本发明解决了大肠杆菌T7表达系统中常见的系统稳定性问题，开发了增强大肠杆菌T7表达系统稳定性的方法。
一种基于阻遏策略增强大肠杆菌 t7 表达系统稳定性方法

[发明专利]用于大肠杆菌中异源蛋白质生产的新的表达和分泌载体系统-CN201280026991.X无效
发明人：埃亚潘·奈尔;苏尼尔·库马尔·苏库马兰;沙拉卡·萨曼特;古尼亚·古普塔;苏塔卡恩·披猜姆图;加内什·萨姆巴西瓦姆 -专利权人：安瑟生物科技私人有限公司
申请日： 2012-04-08 - 公布日： 2014-05-14 - 主分类号： C12N15/67 文献下载
摘要：本发明涉及大肠杆菌中重组DNA表达/分泌系统，其中所述系统将重组蛋白向大肠杆菌周质间隙的基于信号肽易位的潜能与大肠杆菌的膜缺陷型突变体相结合以进一步辅助分泌至细胞间隙中。本发明还涉及表达系统，该表达系统进一步包含辅助质粒以驱动表达转位子来促进过表达重组蛋白的增加的周质分泌。此外，该系统还促进大肠杆菌中目标特定蛋白的有效生产。
用于大肠杆菌中异源蛋白质生产表达分泌载体系统

[发明专利]新大肠杆菌表达系统-CN201910568431.0在审
发明人：王小元;赵磊;胡晓清 -专利权人：江南大学
申请日： 2019-06-27 - 公布日： 2019-09-17 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了新大肠杆菌表达系统，属于基因工程领域。本发明以大肠杆菌为载体，建立了大肠杆菌LPXA缺失突变株，并通过在缺失突变株中引入含SEQ ID NO.1所示lpxA的质粒。应用本发明的表达系统表达目的基因，无需抗生素标签。将本发明的表达系统用于L‑苏氨酸的发酵生产，能够在不影响大肠杆菌的细胞生长的同时，提高L‑苏氨酸的产量。
大肠杆菌大肠杆菌表达系统缺失突变株表达系统苏氨酸基因工程领域目的基因细胞生长质粒抗生素发酵标签引入应用生产

[发明专利]分泌型大肠杆菌表达载体及其应用-CN200410074359.X有效
发明人：陈薇;徐俊杰;郭强;董大勇 -专利权人：中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所
申请日： 2004-09-10 - 公布日： 2006-03-15 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种分泌型大肠杆菌表达载体及其应用，其目的是提供一种可在大肠杆菌中高效分泌表达外源蛋白的分泌型大肠杆菌表达载体及其应用。本发明的分泌型大肠杆菌表达载体，是含有外膜蛋白OmpA的信号肽序列的大肠杆菌表达载体，所述外膜蛋白OmpA的信号肽序列位于启动子序列和多克隆位点序列之间并紧密连接于所述多克隆位点序列。本发明的分泌型大肠杆菌表达载体可在大肠杆菌中高效分泌表达外源蛋白。
分泌大肠杆菌表达载体及其应用

[发明专利]一种在大肠杆菌中表达并降解4-氟苯酚的基因组及其应用-CN202011238798.5有效
发明人：王丽娟;姚泉洪;彭日荷;田永生;高建杰;付晓燕;许晶;李振军;韩红娟;王波;张福建;张文慧;邓永东;王宇 -专利权人：上海市农业科学院
申请日： 2020-11-09 - 公布日： 2022-11-22 - 主分类号： C12N15/53 文献下载
摘要：一种在大肠杆菌中表达并降解4‑氟苯酚的基因组及其应用，利用合成生物学技术将节杆菌的4‑氟苯酚降解系统中各个催化元件进行设计、改造，获得源于节杆菌的、按大肠杆菌表达模式优化后的fpdA2S基因、fpdBS基因、fpdCS基因和fpdDS基因，将该四段基因分别与T7启动子和终止子连接，分别构建基因表达盒，并连接入大肠杆菌表达载体，获得降解4‑氟苯酚的多基因大肠杆菌转化载体。本发明将源于节杆菌的完整异源分解代谢途径引入到大肠杆菌中，从而赋予大肠杆菌原本不具备的降解和耐受4‑氟苯酚的功能，提高细菌对4‑氟苯酚的降解效率，丰富工业应用降解菌资源。
一种大肠杆菌表达降解苯酚基因组及其应用

[发明专利]在原核宿主中生产IL－21-CN200380105873.9在审
发明人： C·常;B·L·赞莫斯特;D·C·卡福特;H·Y·刘;K·S·德琼夫;J·D·米尔;S·D·霍尔德曼 -专利权人：津莫吉尼蒂克斯公司
申请日： 2003-12-12 - 公布日： 2006-01-25 - 主分类号： C12N15/00 文献下载
摘要：本发明描述了用大肠杆菌表达系统大规模生产IL－21的表达载体和方法。载体使用了IL－21编码序列，其中的核苷酸有特异的改变，目的是为在大肠杆菌中翻译而优化密码子和mRNA二级结构。使用表达载体，在补料批量发酵中大肠杆菌表达IL－21的基因(应该是蛋白)，表达水平大于1克每升。本发明还包括转化了IL－21表达载体的0mpT缺陷大肠杆菌菌株。
宿主生产 il 21

[发明专利]一种大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭表达载体及其应用-CN200810247367.8无效
发明人：温廷益;邓爱华;张芸;于雷 -专利权人：中国科学院微生物研究所
申请日： 2008-12-30 - 公布日： 2009-06-10 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭表达载体及其应用。本发明的大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭表达载体，包括如下元件：分泌型信号肽的编码序列、枯草芽孢杆菌的复制起始蛋白的编码序列、枯草芽孢杆菌的启动子序列、大肠杆菌的复制起始序列。本发明的载体既能在大肠杆菌内稳定复制，又能在枯草芽孢杆菌内复制并表达。本发明的载体可应用于建立蛋白质突变体基因库，先将突变基因连入载体，使各种突变基因在大肠杆菌中复制，再将其转入枯草芽孢杆菌中进行表达和筛选，构建突变库的效率相当于大肠杆菌操作系统，不但可以简单灵活的控制库容量大小，而且可以充分利用枯草芽孢杆菌宿主细胞的外分泌表达能力，方便突变库性能的检测和筛选。
一种大肠杆菌枯草芽孢杆菌穿梭表达载体及其应用

[发明专利]大肠杆菌表达载体及其构建方法、应用-CN202211640578.4在审
发明人：卢煜;曹国强;张宇擎;佟小雪;周国旺;李婧瑶;邹德勇;杨娜;李雪姚;杨雪 -专利权人：黑龙江金象生化有限责任公司
申请日： 2022-12-20 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种大肠杆菌表达载体及其构建方法、应用，属于基因工程技术领域。本发明解决了现有大肠杆菌载体在基因表达过程中表达效率低，从而导致其应用于色氨酸生产中色氨酸产率低的问题。所述大肠杆菌表达载体含有一个在大肠杆菌中具有功能的人工合成启动子序列、一段供外源基因插入表达的多克隆位点序列、一个人工转录终止序列、一个可以在大肠杆菌中进行基因克隆表达的抗性筛选标记。所述大肠杆菌表达载体可以实现基因的高效转录与翻译。本发明的大肠杆菌表达载体适用于色氨酸的生产。
大肠杆菌表达载体及其构建方法应用

[发明专利]一种特异识别大肠杆菌O157双链DNA的TALENs制备方法与应用-CN201810114978.9在审
发明人：刘颖;段生云;迟宝峰 -专利权人：内蒙古医科大学
申请日： 2018-02-05 - 公布日： 2019-08-13 - 主分类号： C07K14/195 文献下载
摘要：本发明涉及一种特异识别大肠杆菌O157双链DNA的TALENs制备方法与应用，属于生物技术领域。本发明是根据大肠杆菌O15716S rDNA为靶基因构建、测序和筛选，获得完整TALENs基因，通过载体质粒，利用大肠杆菌原核表达系统，实现TALENs蛋白的高效可溶性表达，经纯化获得特异识别大肠杆菌O157并且，本发明将所制备的TALENs用于大肠杆菌16S rDNA的检测。本发明将可用于大肠杆菌种属检测。
大肠杆菌大肠杆菌O157 特异识别双链DNA 制备蛋白生物技术领域原核表达系统可溶性表达载体质粒靶基因检测测序构建可用应用筛选基因

[发明专利]一种用于表达施式假单胞杆菌肌酐酶的大肠杆菌工程菌-CN202010171043.1在审
发明人：艾林;贺子桐;郑长龙 -专利权人：北京达成生物科技有限公司
申请日： 2020-03-12 - 公布日： 2020-09-18 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于表达施式假单胞杆菌肌酐酶的大肠杆菌工程菌及其构建方法，利用本发明的大肠杆菌工程菌进行发酵而获得，所述大肠杆菌工程菌是通过将含有如下外源DNA的表达载体转化到大肠杆菌(Escherichiacoli)而获得，所述表达载体为将所述外源DNA克隆至大肠杆菌表达载体pET‑28a(+)，得到的表达载体pET28a‑CRN。本发明的的重组施式假单胞杆菌肌酐酶大肠杆菌工程菌培养快速简单，诱导条件容易控制，生产成本低，具有工业化生产的潜力。
一种用于表达施式假单胞杆菌肌酐酶大肠杆菌工程

[发明专利]一种在大肠杆菌中表达瑞替普酶的方法-CN200710303763.3无效
发明人：孙石静;张春娥;蔡国平 -专利权人：清华大学深圳研究生院
申请日： 2007-12-21 - 公布日： 2008-06-11 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明公开了一种在大肠杆菌中表达瑞替普酶的方法。本发明所提供的在大肠杆菌中表达瑞替普酶的方法是将瑞替普酶基因插入到原核表达载体的多克隆位点，得到重组表达载体，再将该重组表达载体与质粒pREP4共转化大肠杆菌，得到重组大肠杆菌，培养该重组大肠杆菌，表达得到瑞替普酶本发明方法可以大大提高瑞替普酶在大肠杆菌中的表达量，用本发明方法培养上述重组大肠杆菌，每升培养基中瑞替普酶的表达量占总蛋白的48±5％。
一种大肠杆菌表达瑞替普酶方法

[发明专利]一种利用重组大肠杆菌分泌表达纳米抗体Cablivi的方法-CN202211511243.2在审
发明人：左涛;刘立;汪芸;刘连杰;王满朝 -专利权人：江苏耀海生物制药有限公司
申请日： 2022-11-29 - 公布日： 2023-03-21 - 主分类号： C07K16/36 文献下载
摘要：本发明涉及一种利用重组大肠杆菌分泌表达纳米抗体Cablivi的方法。具体通过筛选获得可提高Cablivi表达量的信号肽，结合优化的提取方法，即特定步骤、参数的周质空间提取步骤，来实现纳米抗体Cablivi在大肠杆菌系统中的高效表达。通过对18种信号肽进行筛选，获得DsbA信号肽可显著提高大肠杆菌系统纳米抗体Cablivi表达量，结合优化的渗透压冲击法对周质纳米抗体进行提取，提取的纳米抗体Cablivi产量可达17.6 mg/L。本发明的方法为后续纳米抗体Cablivi的大肠杆菌工业化生产奠定了基础。
一种利用重组大肠杆菌分泌表达纳米抗体 cablivi 方法

[发明专利]一种大肠杆菌益生菌T7表达系统及其应用-CN202310717222.4在审
发明人：徐杰;柳伟强;李美美;申姝茵;王君荣;杨平 -专利权人：苏州泓迅生物科技股份有限公司
申请日： 2023-06-16 - 公布日： 2023-09-19 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明提供了一种大肠杆菌益生菌T7表达系统及其应用，以大肠杆菌益生菌Nissle1917(EcN)为原始菌株，通过基因编辑技术将噬菌体T7RNA聚合酶编码基因整合到EcN基因组中，获得EcN‑T7表达菌株，使之能够“无缝适配”目前最广泛应用的大肠杆菌表达载体；并且在EcN‑T7基础上对内毒素合成路径相关基因进行敲除，进一步降低改造菌株的内毒素水平。本发明构建的大肠杆菌益生菌T7表达系统能够高效表达外源基因，并且极大的降低了内毒素水平，不会引起细胞的免疫反应，简化了下游应用的操作，降低了生产成本，且能够拓展大肠杆菌活菌制剂的应用场景，具有极大的市场前景
一种大肠杆菌益生菌 t7 表达系统及其应用

[发明专利]一种精准定量调控大肠杆菌重组蛋白胞外分泌水平的方法及应用-CN202210258118.9有效
发明人：陈献忠;杨海泉;官剑民;沈微;夏媛媛;曹钰 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-03-16 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种精准定量调控大肠杆菌重组蛋白胞外分泌水平的方法及应用，属于基因工程与发酵工程领域。本发明中构建的色氨酸操纵子结合温敏阻遏系统(TAT)共表达系统可实现大肠杆菌生长前期稳定正常生长，并通过控制发酵温度，调节结构基因的表达水平，以达到调控D,D‑羧肽酶实时表达量、有效促进重组蛋白胞外分泌的效果本发明构建的共表达系统可提高重组大肠杆菌外膜的渗透性，提高了重组蛋白胞外分泌水平，对重组蛋白在大肠杆菌中的高效分泌与生产具有重要指导意义。
一种精准定量调控大肠杆菌重组蛋白外分泌水平方法应用

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